真菌毒素
大米中黄曲霉毒素 B1 的测定（Copure® 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱）
《GB 5009.22-2016 食品
安全国家标准 食品
中黄
曲霉毒素 B 族和 G 族的测定》
大米在储存不当的情况下极易发霉产生霉菌
毒素，且霉菌
离子源
：HESI
毒素可以通过污染食物链，在人体内实现累积，因此大米
扫描方式：正离子模式（ESI+）
中所含霉菌
毒素只有低于最大允许残留限量才能保证人和
鞘气压力：30 arb
辅气压力：8 arb
离子传输管：300 ℃
辅气温度：350 ℃
动物的食用安全。
免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。
逗点生物结合自身产品
优势，建立了免疫亲和 - 高效液相
表 2 组分名称、及特
征离子一览表（* 为定量离子）
色谱串联质谱法测定大米中黄
曲霉毒素 B1（AFB1）含量
名称
母离子
子离子
离子模式
的方法，试样经提取后，经免疫亲和柱净化，经质谱分析，
黄
曲霉毒素 B1
313.1
241.1、285*
ESI+
同
位素内标法定量。经验证，加标回收率范围
95-100%，
13C17-AFB1
330.1
255、301*
ESI+
RSD 值
小于 5%，满足测试要
求。
三、实验测试结果
一、样本前处理
表 3 大米中黄
曲霉毒素 B1 加标回收实验结果
1.1 提取
加标浓度
回收率
平均回收率
（%）
RSD
检测项目
（μg/kg）
（%）
（%）
大米经粉粹后，称取样本 5.00 g( 精确至 0.01 g) 于 50 mL
98.3
离心管 ( 带盖 ) 中，加入 100 μL 同
位素内标工作液（10.0
ng/mL） 后 静 置。 加 入 20 mL 乙 腈 水 溶 液（84+16），
涡旋振荡提取 20 min，8000 r/min 离心 5.0 min。取 4.0
mL 提取液，加入 46 mL PBS 溶液，混匀待净化。
黄
曲霉毒素 B1
1.00
95.7
96.4
1.73
95.2
RT: 0.00
100
90
-
6.01
RT: 2.83
SN: 469
NL: 1.02E4
m/z= 284.50-285.50 F:
ESISRM ms2
313.100
[240.969-240.971,
284.999-285.001] MS
ICIS s2
+
c
80
70
60
1.2 净化 (Copure® 黄
曲霉毒素 B1 免疫亲和柱 )
50
40
30
将免疫亲和柱连接于固
相萃取装置上，将上述全部待净化稀
20
10
0
RT: 2.83
NL: 3.15E3
释液过黄
曲霉毒素 B1 免疫亲和柱（货号：COAFMB103），
SN: 309
m/z= 300.50-301.50 F:
ESISRM ms2
330.125
[255.041-255.043,
301.053-301.055] MS
ICIS s2
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
+
c
流速控制在 1~2 滴 / 秒。然后依次加入 5.0 mL PBS 缓冲溶
液和 5.0 mL 一级水淋洗小柱，弃去全部流出液，压干。用 1.0
mL 甲醇进行洗脱，关闭阀门浸泡 30 s，然后洗脱至进样小
瓶中，LC-MS/MS 测试。
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Time (min)
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
图 1 黄曲霉毒素 B1 校准点外标和同位素内标的定量离子提取色谱 图（1.0 μg/L）
6.01
RT: 0.00
100
90
-
R
T
:
2
.
8
3
N
L
:
9
.
3
2
E
3
SN: 403
1.3 过程空白实验
m/z= 284.50-285.50 F: +
ESISRM ms2 313.100
[240.969-240.971,
c
284.999-285.001] MS
ICIS xiaomi+st-1
80
70
不称取试样，按上述步骤进行实验。
60
50
40
30
20
10
二、仪器条件
0
RT: 2.83
SN: 223
NL: 2.10E3
m/z= 300.50-301.50 F: +
ESISRM ms2 330.125
[255.041-255.043,
301.053-301.055] MS
ICIS xiaomi+st-1
c
100
90
色谱柱：CommaSil® BEH T-C18(2.1 mm×100 mm,3 μm)
流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵溶液
B：甲醇（含 0.1% 甲酸）
流速：0.3 mL/min
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Time (min)
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
图 2 大米中黄曲霉毒素 B1 外标和同位素内标的定量离子提取色谱 图（加标浓度 1.00 μg/kg）
柱温：30℃
进样量：5 μL
订购信息
洗脱程序：梯度洗脱表 1
货号
描述
包装
表 1 梯度洗脱程序
COAFMB103 Copure® 黄
曲霉毒素 B1 免疫亲和柱，3 mL 20 支 / 盒
时间
/min
A/%
B/%
SDC-3000-D
biocomma® 多管涡旋混匀仪
1 台 / 箱
0.0
90
10
BCBS100F-1000
磷酸盐缓冲溶液（PBS）
1000 mL/ 瓶
1.2
2.1
40
10
60
90
2 mL 蓝色聚丙烯盖
，
SC2-1
100 个 / 盒
白色 PTFE/ 红色硅胶垫，9-425
4.8
10
90
2 mL 螺纹棕色样品
瓶，带书写处 11.6*32
V2-AL
100 个 / 盒
mm，9-425
5.0
6.0
90
90
10
10
www.biocomma.cn 171